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細胞分裂素對離體子葉的保綠效應實驗
發布時間:2018-12-03   點擊次數:132次

一、 目的

        使用恒溫培養箱恒溫水浴鍋、了解細胞分裂素對離體子葉的保綠作用及基本原理和方法。

二、原理  細胞分裂素可阻礙核酸水解酶和蛋白水解酶的產生,因此能延緩器官衰老,使離體葉片保綠,保綠作用的強弱可通過測定葉綠素含量的變化來衡量,也可由葉色變黃枯死的時間來衡量。  

三、材料、儀器設備及試劑  

1. 材料:黃瓜子葉;蘿卜子葉。  

2.  儀器設備:電子分析天平;分光光度計;恒溫培養箱;恒溫水浴鍋;25ml容量瓶;25ml刻度試管;試管架;移液管;黃瓜子葉的培養皿(直徑5cm);瓷盤;刀片;尖頭鑷子;濾紙;吸耳球等。  

3. 試劑及配制:100μg·ml-16-BA溶液;95﹪乙醇 ;CaCO3粉末。  100μg·ml-16-BA母液配制:準確稱取6-BA 10mg,  加幾滴1mol·L-1HC1溶解(可稍加熱溶解),然后慢慢加入蒸餾水稀釋后定容至100ml。  

四、實驗步驟  

1. 黃瓜幼苗的培養  精選黃瓜種子,播入墊有濾紙的瓷盤中,加蒸餾水使之濕潤(注意種子不能漬水),待種子萌發后,在光下培養2~3d左右,直至子葉綠化。備用。  

2. 系列濃度6-BA溶液配制:吸取100μg·ml-16-BA母液,稀釋成10、5、0.5  μg·ml-1的系列濃度溶液。  

3. 離體黃瓜子葉的培養  

(1)取4套培養皿,編號,每套培養皿各墊一張濾紙,分別作0.5、5、10μg·ml-1的6-BA溶液和蒸餾水(CK)4個處理,即為第一組。  

(2)選取子葉大小、生長一致的黃瓜幼苗20株,每處理5  株(10片子葉),用刀片切下不附帶葉柄的子葉,分別稱取鮮重,將數據記入下表中。然后將子葉放入第一組相應編號的培養皿中,分別加入不同濃度的6-BA溶液3ml,  對照(CK)加蒸餾水3ml。蓋上培養皿蓋,置于暗處,溫度25-28℃培養3 d 。  另取與第一組相同的黃瓜幼苗20株,用刀片切下不附帶葉柄的子葉作第二組,直接用來測定葉綠素含量。  

4. 第二組黃瓜子葉葉綠素含量的測定  

(1)葉綠素的提取  取3支25ml刻度試管,編號。稱取第二組的黃瓜子葉三份(3個重復),每份10片子葉,然后放入相應編號的刻度試管中,各加入少量CaCO3粉及95﹪乙醇3-4ml,用玻棒小心將子葉搗碎后,將試管放入45℃恒溫水浴提取葉綠素30min左右,直到子葉碎片無色為止,用濾紙過濾于25ml容量瓶中(如殘渣仍帶綠色,可再加幾ml乙醇繼續提取,直至殘渣無綠色)。濾紙上的色素用乙醇慢慢點滴清洗入容量瓶中,最后定容至刻度,搖勻,待測。  

(2)葉綠素含量的測定  在652nm波長處,以95﹪乙  醇為空白對照,測定葉綠素提取液的吸光度(A值)。并按公式計算出葉綠素含量。即為培養前子葉的原始葉綠素含量。  

5. 第一組黃瓜子葉葉綠素殘留量的測定  第一組黃瓜子葉在暗處培養3d后,按上述第(4)步驟方法分別測定各處理子葉葉綠素含量,并按公式計算出各處理葉綠素含量,即為暗培養后子葉葉綠素含量。  

五、結果計算  葉綠素含量計算公式: 

D652 × 提取液總量(ml)  葉綠素含量(mg·g-1Fw)= ——————————————  34.5 × 樣品鮮重(g)  公式中:D652 — 在652nm波長下測定的吸光度值  34.5— 葉綠素a、b在652nm波長處的比吸收系數  培養后葉綠素含量  暗培養后葉綠素含量占培養前葉綠素含量(﹪)= —————————×100  培養前葉綠素含量

六、恒溫培養箱恒溫水浴鍋詳情可咨詢喆圖小編。

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